Pha động tương đương với pha lỏng của máu, và có nhiều điều cần chú ý trong quá trình sử dụng. Trong số đó, có một số “cạm bẫy” cần phải lưu ý.
01. Đo pH của pha động sau khi thêm dung môi hữu cơ
Nếu bạn đo độ pH bằng chất phụ gia hữu cơ, độ pH bạn nhận được sẽ khác so với trước khi thêm dung môi hữu cơ. Tuy nhiên, điều quan trọng nhất là phải nhất quán. Nếu bạn luôn đo độ pH sau khi thêm dung môi hữu cơ, hãy đảm bảo nêu rõ các bước trong phương pháp bạn sử dụng để những người khác cũng làm theo phương pháp tương tự. Phương pháp này không chính xác 100% nhưng ít nhất nó sẽ giữ cho phương pháp được nhất quán. Điều này có thể quan trọng hơn việc có được giá trị pH chính xác.
02. Không sử dụng bộ đệm
Mục đích của bộ đệm là kiểm soát độ pH và ngăn không cho nó thay đổi. Nhiều phương pháp khác làm thay đổi độ pH của pha động, có thể gây ra sự thay đổi về thời gian lưu, hình dạng pic và phản ứng pic.
Axit formic, TFA, v.v. không phải là chất đệm
03. Không sử dụng dung dịch đệm trong phạm vi pH bình thường
Mỗi bộ đệm có độ rộng phạm vi 2 đơn vị pH, trong đó nó mang lại độ ổn định pH tốt nhất. Các chất đệm bên ngoài cửa sổ này sẽ không có khả năng chống lại sự thay đổi pH một cách hiệu quả. Sử dụng bộ đệm trong phạm vi chính xác hoặc chọn bộ đệm có phạm vi pH bạn cần.
04. Thêm đệm vào dung dịch hữu cơ
Trộn dung dịch đệm với pha hữu cơ rất có thể sẽ làm cho dung dịch đệm kết tủa. Trong nhiều trường hợp, ngay cả khi lượng mưa đã xảy ra thì vẫn khó phát hiện. Hãy nhớ luôn thêm dung dịch hữu cơ vào pha nước, điều này có thể làm giảm đáng kể khả năng kết tủa đệm.
05. Trộn gradient nồng độ từ 0% bằng máy bơm
Máy bơm hiện nay có thể trộn pha động và khử khí nội tuyến một cách hiệu quả, nhưng không phải ai sử dụng phương pháp của bạn cũng sẽ có máy bơm chất lượng cao. Trộn A và B thành một giải pháp duy nhất và chạy nội tuyến 100%.
Ví dụ, 950 ml hỗn hợp hữu cơ ban đầu có thể được điều chế bằng cách trộn với 50 ml nước. Ưu điểm của việc này là nó có thể làm giảm sự biến thiên giữa các HPLC và giảm khả năng tạo bọt và kết tủa trong hệ thống. Điều đáng chú ý là tỷ lệ hỗn hợp bơm là 95:5, không có nghĩa là thời gian lưu hỗn hợp trộn sẵn trong chai cũng là 95:5.
06. Không sử dụng đúng axit (bazơ) đã biến tính để thay đệm
Chỉ sử dụng axit hoặc bazơ tạo thành muối đệm mà bạn đang sử dụng. Ví dụ, dung dịch đệm natri photphat chỉ nên được chuẩn bị bằng axit photphoric hoặc natri hydroxit.
07. Không nêu đầy đủ thông tin về bộ đệm trong phương pháp, chẳng hạn như thêm 5gnatri photphat vào 1000ml nước.
Loại đệm xác định phạm vi pH có thể được đệm. Nồng độ cần thiết quyết định cường độ đệm. 5 gam natri photphat khan và 5 gam mononatri photphat monohydrat có cường độ đệm khác nhau.
08. Thêm dung môi hữu cơ trước khi kiểm tra
Nếu phương pháp trước đó sử dụng dung dịch đệm cho đường cơ sở B và phương pháp của bạn sử dụng dung dịch hữu cơ cho đường cơ sở B thì hy vọng bạn có thể lắng đọng chất đệm trong ống bơm và đầu bơm.
09. Nhấc chai lên và đổ hết giọt cuối cùng
Rất có thể bạn sẽ không có đủ pha động để hoàn thành toàn bộ quá trình chạy và mẫu của bạn sẽ bốc khói. Ngoài khả năng làm cháy hệ thống bơm và cột, pha động sẽ bay hơi hoàn toàn và pha động ở đầu chai sẽ thay đổi.
10. Sử dụng pha động siêu âm khử khí
Điểm quan trọng nhất là đảm bảo tất cả muối đệm đều được hòa tan, nhưng đây là cách khử khí tồi tệ nhất và sẽ nhanh chóng làm nóng pha động, khiến các thành phần hữu cơ bay hơi. Để tránh những rắc rối không đáng có sau này, hãy dành năm phút để hút bụi cho pha di động của bạn.
Thời gian đăng: 27-08-2024